活性试剂盒使用注意事项

　　活性试剂盒是一种利用荧光探针DCFH－DA进行活性氧检测的试剂盒。DCFH－DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。

 

　　活性试剂盒对于刺激时间较短（通常为2小时以内）的细胞，先装载探针，后用活性氧阳性对照或自己感兴趣的药物刺激细胞。对于细胞刺激时间较长（通常为6小时以上）的细胞，先用活性氧阳性对照或自己感兴趣的药物刺激细胞，后装载探针。

 

　　细胞凋亡可通过两种起始途径启动，内始式途径由非受体刺激激活，如DNA损伤、内质网应激、代谢应激，线粒体外膜通透性改变，如细胞色素c释放，外源途径通过死亡受体与配体结合开始。

 

　　对于原位装载探针的样品可以用激光共聚焦显微镜直接观察，或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。对于收集细胞后装载探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测，也可以用激光共聚焦显微镜直接观察。

 

　　注意事项：

 

　　1、尽量缩短探针装载后到测定所用的时间（刺激时间除外），以减少各种可能的误差。

 

　　2、探针装载后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。

 

　　3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

　　4、探针装载完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的装载情况是否良好。